柔佛海峡(英语:Straits of Johor;马来语:Selat Johor)是新加坡和马来西亚柔佛州之间水道,东连中国南海,西通马六甲海峡。海峡长50公里,宽1.2~4.8公里。有一条1056米长的新柔长堤连接两岸。
新加坡和马来西亚在1995年8月签订协议,划分柔佛海峡水域的国界。在此之前,两国按照1927年海峡殖民地与柔佛领土水域协议书所划定的一条“假想线”,作为柔佛海峡水域上的国界。